Chemically Competent Cell克隆感受態細胞

XL2-Blue Chemically Competent Cell

基因型：

TetRΔ(mcrA)183 Hte[F′{proAB lacIqlacZM15Tn10(TetR)AmyCamR}](mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA1supE44thi-1 recA1 gyrA96 relA1

簡要說明：

XL2-Blue菌株來源于XL1-Blue菌株，為Hte(hightransformation efficiency)基因型，Hte是Stratagene開發的特異性提高感受態轉化效率及大質粒轉化能力的宿主菌基因型，已成功應用于40kd質粒的構建。Hte使得XL2-Blue適用于大質粒DNA和重組產物的轉化，降低片段大小的偏愛性，多用于文庫構建。recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩定和高純度質粒DNA的提取。hsdSMR突變導致EcoK核酸內切酶系統缺失，增強了外源DNA的穩定性和提取質量。 lacZΔM15 的存在使XL2-Blue菌株可用于藍、白斑篩選。此菌株具有四環素和LU霉素抗性。High5TM系列XL2-Blue感受態細胞經特殊工藝制作，經pUC19質粒檢測轉化效率>1×109cfu/μg。

操作說明：

1.XL2-Blue感受態細胞放置冰中融化（或放手心或室溫片刻，待菌體處于冰水混合狀態時迅速插入冰中），加入目的DNA（質粒或連接產物）并用手打EP管底輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。 

2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。

3.向離心管中加入700μl不含抗生素的2YT或LB無菌培養基，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。 

4.5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。

5.將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養至少14h。

注意事項：

1.感受態細胞最好在冰上融化。 

2.混入質粒或連接產物時應輕柔操作。

3.轉化高濃度的質粒或高效率的連接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。