Chemically Competent Cell克隆感受態細胞

XL1-Blue MRF`Kan Chemically Competent Cell      保存條件：-80℃

基因型：

?(mcrA)183 ?(mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA1 supE44 thi-1recA1 gyrA96 relA1 lac [F′proAB lacIqZ?M15 Tn5 (KanR)

簡要說明：

XL1-Blue MRF’Kan 菌株來源于 XL1-Blue 株系，是限制酶系統缺失型[? (mcrA)183, ? (mcrCB-hsdSMR -mrr)173],且具有KA那霉素抗性 (Kanr )，可轉化具有lu霉素或四環素抗性的質粒。recA1 和 endA1 的突變 有利于插入 DNA的穩定和高純度質粒 DNA 的提取。hsdR17 突變導致 EcoK 核酸內切酶系統缺失，增強了 外源 DNA 的穩定性和提取質量。lacI q ZΔM15 的存在使 XL1-Blue MRF’Kan 菌株可用于藍、白斑篩選。 XL1-Blue MRF’Kan 感受態細胞經特殊工藝制作，pUC19 質粒檢測轉化效率>108 cfu/μg DNA。

操作說明：

1.XL1-Blue MRF’Kan 感受態細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，待菌塊融化，加入目的 DNA 并用 手打 EP 管底充分混勻，冰中靜置 25 分鐘。

2.42℃水浴熱激 45 秒，迅速放回冰上并靜置 2 分鐘，晃動會降低轉化效率。

3.向離心管中加入 700 μl 不含抗生素的無菌培養基 (2YT 或LB)，混勻后 37℃，200 rpm 復蘇 60 分鐘。

4.5000 rpm離心一分鐘收菌，留取 100 μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的 2YT 或 LB 培養基上。

5. 將平板倒置放于 37℃培養箱過夜培養。

注意事項：

1.感受態細胞最好在冰中緩慢融化，插入冰中 8 分鐘內加入目標 DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存 放會降低轉化效率。

2.XL1-Blue MRF’Kan 感受態細胞具有KA 那霉素抗性，不可轉化具有KA 那霉素抗性的質粒。

3. 轉化高濃度的質?；蚋咝实倪B接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。