Chemically Competent Cell克隆感受態(tài)細(xì)胞

 JM110 Chemically Competent Cell

基因型：

rpsL (StrR) thr leu thi-1 lacY galK galT ara tonA tsxdam dcm supE44 Δ(lac-proAB) /F′ [traD36 proABlacIqlacZΔM15]

簡(jiǎn)要說明：

JM110菌株具有硫酸-(StrR)  LIAN霉素抗性(StrR) ；是甲基化基因dam、dcm 缺失的菌株，提取得到的質(zhì)粒DNA，可被對(duì)dam、dcm甲基化敏感的內(nèi)切酶切割； lacIqlacZΔM15的存在使JM110可以進(jìn)行藍(lán)白斑篩選，但轉(zhuǎn)化效率不高  High5TM系列JM110感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，經(jīng)pUC19 質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率約107 cfu/μg。一般不用于質(zhì)粒構(gòu)建，只適用于質(zhì)粒轉(zhuǎn)化。

操作說明：

1.JM110感受態(tài)細(xì)胞放置冰中融化（或放手心或室溫片刻，待菌體處于冰水混合狀態(tài)時(shí)迅速插入冰中），加入目的DNA并用手打EP管底輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。

2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

3.向離心管中加入700μl不含抗生素的2YT或LB無菌培養(yǎng)基，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。

4.5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)：

1.感受態(tài)細(xì)胞最好在冰上融化。冰上放置大約5分鐘即可融化，融化后不可久放，八分鐘內(nèi)加入質(zhì)粒，否則會(huì)影響轉(zhuǎn)化效率。

2.混入質(zhì)粒時(shí)應(yīng)輕柔操作。

3.轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。