JM109 Chemically Compete Cell

基因型：

endA1 recA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 (rk-,mk+) relA1 supE44D (lac-proAB) [F′traD36 proAB laqIqZΔM15

簡要說明：

JM109菌株來源于E.coli K strain，是提取高質量DNA的理想菌株，recA1 和 endA1 的突變有利于克隆DNA 的穩定和高純度質粒 DNA 的提取。攜帶 hsdR17基因型背景，使得異源DNA不被內源核酸酶系統降解。laqI qZΔM15的存在使JM109可用于構建克隆，藍白斑篩選實驗；High5TM系列JM109感受態細胞經特殊工藝制作，經pUC19質粒檢測轉化效率可達1×109cfu/μg。

操作說明：

1.JM109感受態細胞放置冰中融化（或放手心或室溫片刻，待菌體處于冰水混合狀態時迅速插入冰中），加入目的DNA（質粒或連接產物）并用手打EP管底輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。

2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。

3.向離心管中加入700μl不含抗生素的2YT或LB無菌培養基，混勻后37℃，200rpm復蘇60分鐘。

4.5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。

5.將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。

注意事項：

1.感受態細胞最好在冰上融化。冰上放置大約5分鐘即可融化，融化后8分鐘內加入質粒，否則會影響轉化效率。

2.混入質粒或連接產物時應輕柔操作。

3.轉化高濃度的質粒或高效率的連接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。