Chemically Competent Cell克隆感受態細胞

基因型：

F′{lacIq Tn10 (TetR)} mcrA ?(mrr-hsdRMS-mcrBC)Φ80lacZ?M15 ?lacX74 recA1araD139?(ara-leu)7697 galUgalK rpsL endA1 nupG

簡要說明：

TOP-10F`菌株來源于TOP-10菌株。將F`{lacIq Tn10 (TetR)}因子轉入TO-P10菌株，即為TOP-10F`。該F`因子攜帶lacIq 抑制子，可抑制trc，tac，lac等啟動子下游基因的表達，從而可以用于一些表達毒性蛋白質粒的擴繁。recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩定和高純度質粒DNA的提取。 TOP-10F’可用于構建克隆，藍白斑篩選（如用于藍白斑篩選，需在培養基中加入IPTG誘導β-半乳糖苷酶基因的表達）實驗，具有四環素抗性。 High5TM系列TOP-10F`感受態細胞經特殊工藝制作，經pUC19質粒檢測轉化效率>108cfu/μg。

操作說明：

1.TOP-10F`感受態細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，待菌塊融化，加入目的DNA（質粒或連接產物）并用手打EP管底輕輕混勻，冰中靜置25分鐘。

2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。

3.向離心管中加入700μl不含抗生素的2YT或LB無菌培養基，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。 

4.5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。

5.將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。如果進行藍白斑篩選，將平板放37℃培養至少13h。

注意事項：

1.感受態細胞最好在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時 間過長，長時間存放會降低轉化效率。

2.混入質?；蜻B接產物時應輕柔操作。

3.轉化高濃度的質粒或高效率的連接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。