基因型

F- ompT hsdSB(rB- mB- ) gal dcm rne131 (DE3)

簡要說明

BL21 Star(DE3)感受態細胞來源于BL21(DE3)菌株，含有rne131基因突變體，rne131突變基因能夠增強菌株細胞內mRNA的穩定性，從而提高蛋白表達能力。主要適用于T7啟動子表達載體(如pET系列)的高水平蛋白表達。BL21 Star(DE3)感受態細胞由特殊工藝制作，經pUC19質粒檢測轉化效率達108cfu/μg。

操作說明

1、取100μl冰上融化的BL21 Star(DE3)感受態細胞，加入目的質粒并輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。

2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。 

3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌2YT或LB培養基，混勻后37℃，200rpm復蘇60分鐘。

4.5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。

5.將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。

注 意：

1.Brian Caliendo (Voigt 實驗室)報道過pCP20質粒比較難于轉化到這個感受態細胞中，而pCP20轉化到其他菌株中都很正常，但是菌體原因未知。

2.即使不加葡萄糖，BL21(AI) 細胞的araBAD啟動子下游的本底蛋白表達水平仍然很低，加入葡萄糖后能夠進一步的降低本底蛋白的表達水平。

注意事項

1、感受態細胞最好在冰上融化。插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。 

2.混入質粒時應輕柔操作。

3.轉化高濃度的質?？上鄳獪p少最終用于涂板的菌量。

4.誘導時，IPTG濃度可選（0.1-2mM均可）。

5.為獲得需要量的蛋白，最佳誘導時間、溫度以及IPTG濃度需實驗者優化