Chemically Competent Cell克隆感受態(tài)細胞

MG1655 Chemically Competent Cell

基因型：

K12 F- llambda- ilvG- rfb-50 rph-1

簡要說明：

MG1655菌株來源于W1485，是K12的衍生菌株，是一種經(jīng)過較少改造，比較接近于“WT-野生型"的大腸桿菌工程菌株。MG1655外觀形態(tài)標準，同時可做為擴增大腸桿菌WT型基因的模板使用，也可作為蛋白表達的宿主菌株使用，但不含核酸酶endA1突變，體內(nèi)核酸酶含量較高，提取質(zhì)粒時務必使用質(zhì)粒提取試劑盒中去蛋白液盡量去除核酸酶，以防提取的質(zhì)粒被降解。pUC19質(zhì)粒檢測轉化效率>0.5×108 cfu/μg DNA。

操作說明：

1.感受態(tài)細胞放置冰中融化（或放手心或室溫片刻，待菌體處于冰水混合狀態(tài)時迅速插入冰中），加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）并用手bo打EP管底輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。

2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。 

3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌2YT或LB培養(yǎng)基，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。 

4.5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。 

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15h。

注意事項：

1. 感受態(tài)細胞最好在冰上融化。冰上放置大約5分鐘即可融化，融化后8分鐘內(nèi)加入質(zhì)粒， 否則會影響轉化效率。 

2.混入質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物時應輕柔操作。 

3.轉化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應減少最終用于涂板的菌量。