MG1655 Chemically Competent Cell

基因型：

K12 F- llambda- ilvG- rfb-50 rph-1

簡要說明：

MG1655菌株來源于W1485，是K12的衍生菌株，是一種經過較少改造，比較接近于“WT-野生型"的大腸桿菌工程菌株。MG1655外觀形態標準，同時可做為擴增大腸桿菌WT型基因的模板使用，也可作為蛋白表達的宿主菌株使用，但不含核酸酶endA1突變，體內核酸酶含量較高，提取質粒時務必使用質粒提取試劑盒中去蛋白液盡量去除核酸酶，以防提取的質粒被降解。pUC19質粒檢測轉化效率>0.5×108 cfu/μg DNA。

操作說明：

1.感受態細胞放置冰中融化（或放手心或室溫片刻，待菌體處于冰水混合狀態時迅速插入冰中），加入目的DNA（質粒或連接產物）并用手bo打EP管底輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。

2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。 

3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌2YT或LB培養基，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。 

4.5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。 

5.將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養至少15h。

注意事項：

1. 感受態細胞最好在冰上融化。冰上放置大約5分鐘即可融化，融化后8分鐘內加入質粒， 否則會影響轉化效率。 

2.混入質粒或連接產物時應輕柔操作。 

3.轉化高濃度的質粒或高效率的連接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。