Chemically Competent Cell克隆感受態細胞

S17-1 λpir Chemically Competent Cell

基因型：

RP4-2(Km::Tn7,Tc::Mu-1), pro-82, LAMpir, recA1, endA1,thiE1, hsdR17, creC510

簡要說明：

S17-1λpir菌株的染色體中整合了RP4-2質粒，該質粒可以攜帶染色體的部分DNA在接合菌株之間轉移。S17- 1λpir菌株缺失核酸內切酶 (endA1)，提高了質粒DNA的產量和質量；同時為重組酶缺陷型 (recA1)，減少插入片段的同源重組概率，保證了插入DNA 的穩定性。Tn7賦予該菌株弱的 lian霉素抗性。 S17-1λpir感受態細胞經特殊工藝制作，pUC19質粒檢測轉化效率>1×108 cfu/μg DN

操作說明：

1. S17-1λpir感受態細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，待菌塊融化，加入目的DNA（質粒或連接產物）并用手bo打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。 

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。 

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養基 (LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。 

4. 5000 rpm離心1分鐘收集菌體，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的LB培養基上。 

5. 將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養（12-15 h）。

注意事項：

1. 感受態細胞最好在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。 

2. 轉化高濃度的質粒或高效率的連接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。