Chemically Competent Cell克隆感受態細胞

MC1061F- Chemically Competent Cell

基因型：

araD139 Δ (araA-leu)7697 Δ(lac)X74 galK16 galE15(GalS)lambda- e14- mcrA0 relA1 rpsL150(StrR) spoT1 mcrB1 hsdR2

簡要說明：

MC1061F-菌株來源于E.coli B/r型SB3118菌株，同時也是DH10b及TOP-10的母本菌株。MC1061F-化轉感受態細胞轉化效率ji高，可用作實驗室的常規質粒構建及噬菌體展示實驗，但缺乏F`因子，不能用于絲狀噬菌體（比如M13）的感染。不含核酸酶endA1突變，體內核酸酶含量較高，提取質粒時務必使用質粒提取試劑盒中去蛋白液盡量去除核酸酶對質粒的污染。此菌株具有lian霉素抗性。 MC1061F-感受態細胞經特殊工藝制作，pUC19質粒檢測轉化效率>2×109 cfu/μg DNA。

操作說明：

1. MC1061F-感受態細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，待菌塊融化，加入目的DNA（質粒或連接產物）并用手bo打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。 

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。 

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌2YT或LB培養基，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。 

4. 5000 rpm離心1分鐘收集菌體，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。 

5. 將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養至少15 h。

注意事項：

1.感受態細胞最好在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。 

2. 轉化高濃度的質粒或高效率的連接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。