EPI400 Chemically Competent Cell

基因型：

F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80dlacZΔM15 ΔlacX74recA1 endA1 araD139 Δ(ara, leu)7697 galU galK λ- rpsL(StrR) nupG trfA tonA pcnB4 dhfr

簡要說明：

EPI400菌株來源于 EC100菌株，將 EC100 核基因中控制質粒拷貝數的 pcnB基因刪除后引入一個誘導啟動子驅動的 pcnB基因，即是EPI400 菌株。 EPI400 菌株可以降低質粒的拷貝數，特別適合于各種不穩定DNA 或毒性基因的克隆，在加入誘導劑Copy Cutter InductionSolution后又可以提高質粒產量到正常狀態。 [mcrA, Δ(mrrhsdRMS-mcrBC)]基因型使 EPI400 菌株適合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA。 recA1 和endA1 的突變有利于插入DNA 的穩定和高純度質粒 DNA 的提取。lacZΔM15 標記的存在使EPI400可用于藍白斑篩選，tonA 賦予其抗噬菌體T1和 T5的能力，rpsL賦予其LIAN霉素抗性。EPI400感受態細胞經特殊工藝制作，pUC19質粒檢測轉化效率>108 cfu/μg DNA。

操作說明：

1. EPI400感受態細胞放置冰中融化（或放手心或室溫片刻，待菌體處于冰水混合狀態時迅速插入冰中），加入目的DNA（質粒或連接產物）并用手bo打EP管底輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。 

2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。 

3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌2YT或LB培養基，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。 

4.5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。 

5.將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。

注意事項：

1.感受態細胞最好在冰上融化。 

2. 混入質粒或連接產物時應輕柔操作。 

3. 轉化高濃度的質粒或高效率的連接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。