Chemically Competent Cell克隆感受態(tài)細(xì)胞

HB101 Chemically Competent Cell

基因型：

F- mcrB mrr hsdS20(rB- mB-) recA13 leuB6 ara-14 proA2lacY1 galK2 xyl-5 mtl-1 rpsL20 (strR) glnV44λ-

簡(jiǎn)要說(shuō)明：

HB101菌株是 E. Coli K12菌株和 E. Coli B 菌株的雜合產(chǎn)物（同時(shí)也是Stbl3的原始菌株）。recA13突變可有效抑制長(zhǎng)片段末端重復(fù)區(qū)的重組，降低錯(cuò)誤重組的概率；但不含核酸酶endA1突變，體內(nèi)核酸酶含量較高，提取質(zhì)粒時(shí)務(wù)必使用質(zhì)粒提取試劑盒中去蛋白液。hsdS20背景使HB101缺失內(nèi)切酶系統(tǒng)，增強(qiáng)了外源DNA的穩(wěn)定性和提取質(zhì)量；此菌株具有LIAN霉素抗性；不存在lacIqZΔM15，不可用于藍(lán)、白斑篩選。  High5TM系列HB101感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>5×108cfu/μg。

操作說(shuō)明：

1.HB101感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，待菌體處于冰水混合狀態(tài)時(shí)，加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物并用手打EP管底輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。

2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。 

3.向離心管中加入700μl不含抗生素的2YT或LB無(wú)菌培養(yǎng)基，混勻后37℃，200rpm復(fù)蘇60分鐘。 

4.5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。 

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)：

1.感受態(tài)細(xì)胞處于冰水混合狀態(tài)時(shí)立即插入冰上。 

2.混入質(zhì)粒或連接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。 

3.轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。 

4.操作過(guò)程中勿將感受態(tài)暴露于氧化性環(huán)境中，例如超凈臺(tái)應(yīng)將臭氧排凈后再使用。