Chemically Competent Cell克隆感受態細胞

Stbl2 Chemically Competent Cell

基因型：

F- mcrAΔ(mcrBC-hsdRMS-mrr) recA1 endA1 lon gyrA96 thisupE44 relA1 λ-Δ(lac-proAB)

簡要說明：

Stbl2菌株來源于JM109 E.coli strain，適合克隆不穩定插入片段（正向重復序列，逆轉錄病毒序列等）；mcrA突變和mcrBC-hsdRMS-mrr deletion使該菌株更適于克隆甲基化的基因組序列；同時Stbl2也可用于慢病毒載體的構建。recA1和endA1的突變有利于克隆DNA的穩定和高純度質粒DNA的提取。不存在lacIqZΔM15，不可用于藍、白斑篩選。High5TM系列Stbl2感受態細胞經特殊工藝制作，經pUC19檢測轉化效率可達109cfu/μg DNA。

操作說明：

1.Stbl2感受態細胞放置冰中融化（或放手心或室溫片刻，待菌體處于冰水混合狀態時迅速插入冰中），加入目的DNA（質粒或連接產物）并用手打EP管底輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。 

2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。 

3.向離心管中加入0.9 mL 室溫 S.O.C. 培養基或LB培養基(推薦使用S.O.C培養基，提高轉化效率)。

4.30℃，225 rpm復蘇90分鐘。（當質粒中含有不穩定片段時，30℃培養可降低錯誤重組的概率，若轉化control PUC19計算轉化效率，則需37℃，225 rpm復蘇60分鐘。） 

5. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的S.O.C.或LB培養基上。 

6.將平板倒置放于30℃培養箱過夜培養。（若轉化controlPUC19 計算轉化效率，則需37℃培養過夜）。

注意事項：

1.感受態細胞最好在冰上融化。

2.混入質粒或連接產物時應輕柔操作。 

3.轉化高濃度的質粒或高效率的連接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。

 4.S.O.C.或LB培養基均可使用，S.O.C.可提高轉化效率20%；實驗人員可選擇在37℃或30℃培養細胞，37℃條件下，菌生長速度加快，有利于提高質粒產量，30℃培養可降低錯誤重組概率。