Chemically Competent Cell克隆感受態細胞

DB3.1 Chemically Competent Cell

基因型：

F- gyrA462 endA1 glnV44 (sr1-recA)mcrBmrrhsdS20(rB-,mB-)ara14galK2lacY1proA2rpsL20(Smr) xyl5 Δleu mtl11

簡要說明：

DB3.1大腸桿菌菌株基因組中含有 gyrA462 基因，賦予其對ccdB毒性基因的抗性，特別適用于構建或擴繁含有ccdB基因的質粒載體（例GATEWAY System vector) ，此菌株具有鏈MRI-素抗性。 High5TM系列DB3.1感受態細胞經特殊工藝制作，經pUC19檢測轉化效率>108 cfu/μg DNA。

操作說明：

1.DB3.1感受態細胞放置冰中融化（或放手心或室溫片刻，待菌體處于冰水混合狀態時迅速插入冰中），加入目的DNA并用指尖輕輕打管底混勻(避免用槍吸打)，冰上靜置25分鐘。

2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。 

3.向離心管中加入700μl不含抗生素的2YT或LB無菌培養基，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。

4.5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。 

5.將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。

注意事項：

1. 感受態細胞最好在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。

2. 混入目的DNA時應輕柔操作。 

3. 轉化高濃度的質粒或高效率的連接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。