Chemically Competent Cell克隆感受態細胞

基因型：

F-φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1

簡要說明：

DH5α菌株是實驗室常用的感受態細胞。 缺失核酸內切酶(endA)，提高了質粒DNA的產量和質量；重組酶缺陷型(recA)減少插入片段的同源重組概率，保證了插入DNA的穩定性；lacZΔM15的存在使DH5α可用于藍、白斑篩選。DH5α菌株的缺點是生長緩慢，37℃需培12-14小時才能看見克隆；如需加快試驗速度，請選用TG1，Mach1-T1，XL10-Gold等生長速度快的感受態細胞。High5TM系列DH5α感受態細胞經特殊工藝制作，經pUC19質粒檢測轉化效率約1×109cfu/μg。

操作說明：

1. DH5α感受態細胞放置冰中融化（或放手心或室溫片刻，待菌體處于冰水混合狀態時迅速插入冰中），加入目的DNA（質粒或連接產物）并用手攪打EP管底輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。

2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。

3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養基（2YT或LB），混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。

4.5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。

5.將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養至少17h。

注意事項：

1.感受態細胞最好在冰上融化。冰上放置大約5分鐘即可融化，融化后8分鐘內加入質粒,否則會影響轉化效率。

2.混入質粒或連接產物時應輕柔操作。

3.轉化高濃度的質粒或高效率的連接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。